凯发k8娱乐真人旗舰厅(中国)首页登录ღღ◈◈，凯发K8官网首页登录ღღ◈◈，K8凯发ღღ◈◈，制药厂是环境中抗菌素耐药性（AMR）的重要来源ღღ◈◈。制药废水中超过一半的抗菌药物无法通过传统的废水策略进行去除ღღ◈◈，从而通过排放进入到环境中小池荣子ღღ◈◈，并诱导ARGs和ARB的出现和增殖ღღ◈◈。磺胺类药物是最常用的抗生素之一小池荣子ღღ◈◈。相比于其它环境介质ღღ◈◈，制药废水中的磺胺类药物残留浓度最高ღღ◈◈，浓度可达mg/Lღღ◈◈。磺胺类药物因其具有水解稳定性ღღ◈◈、半衰期长等特点ღღ◈◈，经常在各类制药废水受纳环境中被检测到ღღ◈◈。同时ღღ◈◈，残留的抗生素可以通过废水排放输送到下游河流ღღ◈◈，并经灌溉等过程迁移到深层土壤甚至地下水中ღღ◈◈。然而ღღ◈◈，目前关于ARGs和ARB沿纳污河流的水平迁移以及在纳污土壤中的垂直迁移仍存在一定的研究空白K8凯发娱乐ღღ◈◈。

　　目前对磺胺类药物的耐药机制有两种ღღ◈◈：（i）抗生素靶位点的改变（即sul1-4）和（ii）磺胺类药物的酶促降解K8凯发娱乐ღღ◈◈。后者不仅代表了一种耐药机制ღღ◈◈，也代表了一种可以减少环境中磺胺类药物残留的清洁策略ღღ◈◈。迄今为止ღღ◈◈，sadABC基因簇是唯一经过实验验证的磺胺类降解基因簇小池荣子ღღ◈◈。降解过程包括sadA编码的单加氧酶催化磺酰胺的初始ipso-羟基化ღღ◈◈，然后是与sadB相关的后续转化ღღ◈◈，而sadC在两步反应中主要起辅助作用ღღ◈◈。Sad基因此前仅在Microbacteriaceae和Micrococcaceae的细菌分离株中被报道ღღ◈◈。然而ღღ◈◈，一些其它的细菌也被报道具有磺胺类药物降解能力ღღ◈◈，这意味着环境中可能仍存在待发现的sad基因宿主ღღ◈◈。由于大多数细菌是不可被培养的ღღ◈◈，因此宏基因组测序在鉴定未知的sad基因宿主方面具有重要价值ღღ◈◈。

　　本研究旨在探索制药废水受纳环境中抗生素抗性组和磺胺降解基因/细菌的传播ღღ◈◈。我们采用宏基因组学方法全面分析了总抗性组ღღ◈◈、高风险ARGsღღ◈◈、多重耐药菌和致病菌的丰度和多样性ღღ◈◈，以揭示制药废水排放对受纳河流和土壤环境中AMR的影响ღღ◈◈。此外ღღ◈◈，我们还对sad基因进行了宿主预测和系统发育分析ღღ◈◈，以探索潜在的磺胺降解菌及其环境进化ღღ◈◈。这项研究的结果为评估与制药废水排放相关的AMR风险以及磺胺类药物污染的生物修复提供了重要启示ღღ◈◈。

　　1.制药废水受纳环境中的抗性组水平较高ღღ◈◈。在本研究的样品中共检测到1030种ARG亚型ღღ◈◈，属于28种ARG类型小池荣子ღღ◈◈。其中磺胺类抗性基因sul1ღღ◈◈、sul2和多重耐药类抗性基因qacedelta1是最主要的ARGsღღ◈◈。沿河流流向ღღ◈◈，水体和沉积物中的ARGs总丰度和丰富度从制药厂附近至最远端显著降低ღღ◈◈。值得注意的是ღღ◈◈，纳污河流中所有样品点的河水和沉积物的抗性组丰度均高于自然水体和沉积物的全球中位数水平ღღ◈◈，并且大部分高于污水处理厂出水的全球中位数水平ღღ◈◈，这意味着纳污河流的抗性组水平即便经过水体稀释作用仍然较高ღღ◈◈。制药废水显著改变了土壤的抗性组组成ღღ◈◈，ARGs总丰度和丰富度显著增加ღღ◈◈，6种ARG类型在纳污土壤中被显著富集ღღ◈◈，尤其是磺胺类抗性基因ღღ◈◈，总丰度增加了约22倍ღღ◈◈。纳污土壤的抗性组总丰度均高于自然土壤的全球中位数水平ღღ◈◈，而未被浸没的土壤样品均低于全球基线进一步强调了制药废水对土壤的影响ღღ◈◈。

　　图1.纳污河流和土壤中的抗生素抗性组ღღ◈◈。（a）本研究的采样图ღღ◈◈。（b）纳污河流的PCoA分析ღღ◈◈。（c）纳污河流样品总抗性组的丰度和丰富度ღღ◈◈。（d）地表土的PCoA分析ღღ◈◈。（e-f）两个地表土区域总抗性组的丰度和丰富度ღღ◈◈。（g）两个地表土区域中不同ARG类型的总丰度ღღ◈◈。

　　2.纳污土壤的抗性组总丰度和丰富度随深度显著降低K8凯发娱乐K8凯发娱乐ღღ◈◈。在不同深度的土壤样品中共检测到800种ARG亚型ღღ◈◈，属于27种ARG类型ღღ◈◈，其中磺胺类抗性基因（47.2%）和多重耐药类抗性基因（14.5%）是最主要的ARG类型ღღ◈◈。土壤的抗性组组成沿深度发生了显著的变化ღღ◈◈，总丰度和丰富度均显著下降ღღ◈◈。例如ღღ◈◈，最深层土壤中磺胺类抗性基因的丰度仅为地表土中的14.43%ღღ◈◈。值得注意的是ღღ◈◈，在20-40cm的深度ღღ◈◈，丰富度已经显著降低ღღ◈◈，且大多数样品的抗性组总丰度已经低于自然土壤的全球中位数水平ღღ◈◈。从地表土到20-40cm深度ღღ◈◈，抗性组总丰度平均降低了63.68%ღღ◈◈，丰富度平均降低了40.14%ღღ◈◈。

　　图2.纳污环境中不同土壤深度的抗生素抗性组ღღ◈◈。（a）不同土壤柱样品的抗性组分布特征ღღ◈◈。（b）PCoA分析ღღ◈◈。（c）不同土壤深度的总抗性组丰度ღღ◈◈。（d）不同土壤深度的抗性基因丰富度ღღ◈◈。

　　3. Rank I ARGs的检出突出了纳污环境中的AMR风险ღღ◈◈。在河水ღღ◈◈、沉积物和土壤中分别检出了61ღღ◈◈、71和59种risk rank I ARGsღღ◈◈。与总抗性组的变化相似ღღ◈◈，rank I ARGs的总丰度沿河流和土壤垂直梯度均有所下降小池荣子K8凯发娱乐ღღ◈◈，最终可以降低约一个数量级ღღ◈◈。值得注意的是ღღ◈◈，所有河流样品中的rank I ARGs总丰度均远高于全球污水处理厂出水的中位数水平小池荣子ღღ◈◈，而深层土壤中的总丰度仍与污水处理厂出水丰度相当ღღ◈◈。21ღღ◈◈、25和21种rank I ARGs分别在河水ღღ◈◈、沉积物和土壤中持续存在K8凯发娱乐ღღ◈◈。其中17种ARGs在所有环境介质中均被检测到ღღ◈◈，sul1的含量最为丰富ღღ◈◈，占rank I ARG总丰度的43.63%ღღ◈◈。

　　图3.制药废水受纳环境中的risk rank I ARGK8凯发娱乐ღღ◈◈。河水（a）ღღ◈◈、沉积物（b）和不同土壤深度（c）样品中risk rank I ARGs的丰富度ღღ◈◈、总丰度ღღ◈◈、组成特征ღღ◈◈。

　　4.制药废水受纳环境中潜在的多重耐药菌和致病菌ღღ◈◈。从所有样本中共组装到了2150个MAGsღღ◈◈，其中有340个基因组携带了ARGsღღ◈◈，携带的ARGs主要属于多重耐药类ღღ◈◈、万古霉素类ღღ◈◈。有113个MAG携带了至少两个ARGsღღ◈◈。此外小池荣子ღღ◈◈，我们鉴定到了17个潜在致病菌ღღ◈◈，尽管它们仅是ARG宿主的一小部分ღღ◈◈，但携带了大量的ARGs（17个MAGs携带了73个ARGs）ღღ◈◈，其中47.06%的MAGs对多个药物具有耐药性ღღ◈◈。值得注意的是ღღ◈◈，ARB的总丰度沿河流并没有显著降低ღღ◈◈，尽管约一半的多重耐药菌和致病菌的丰度随河流呈下降趋势K8凯发娱乐ღღ◈◈，但Mycobacteriaceae和Burkholderiaceae的某些MAGs在河流中持续存在ღღ◈◈。土壤中ARB的丰度和丰富度可以随着土壤深度的增加而显著降低ღღ◈◈，其中属于放线菌门和变形菌门的ARB丰度降低幅度较大ღღ◈◈，而一些未培养的多重耐药MAGs（例如ღღ◈◈：Nitrospirotaღღ◈◈、Patescibacteria的MAGs）在深层土壤中反而含量更高ღღ◈◈。

　　图5.sad基因的系统发育和潜在细菌宿主ღღ◈◈。基于本研究和NCBI数据库中sadA（a）和sadB（b）氨基酸序列的系统发育树分析ღღ◈◈。（c）携带了sad基因的MAG的相对丰度和抗性风险

　　本研究揭示了ARGs和ARB在制药废水受纳环境中的持久性小池荣子ღღ◈◈，并探讨了sad基因在这些环境中的进化与传播特征ღღ◈◈。我们发现纳污土壤中ARGs的丰度和多样性显著增加ღღ◈◈，纳污河流中抗性组水平持续高于全球抗性组基线ღღ◈◈，强调了制药废水对受纳环境的显著影响ღღ◈◈。高风险ARGs与多重耐药致病菌的持续存在突出了纳污土壤和河流环境中的耐药性风险ღღ◈◈。此外ღღ◈◈，sadA基因与sadB基因的系统发育特征突出了环境中sad基因的进化发育ღღ◈◈，以及新潜在宿主菌（可能隶属于Propionibacteriaceae和Mycobacteriaceae科）的出现ღღ◈◈。总体而言ღღ◈◈，本研究为制药废水受纳环境中抗生素抗性组的持久性和传播规律提供了新的见解ღღ◈◈，并强调了抗生素酶降解功能基因在这些环境中的富集ღღ◈◈。

　　本研究得到了国家重点研发计划（2020YFC1806901）ღღ◈◈，国家自然科学基金（NSFC 42030703ღღ◈◈、42177226和U22A20604）的支持ღღ◈◈。同时感谢广东省化学污染与环境安全重点实验室（2019B030301008）的支持ღღ◈◈。